Tinción de Romanowsky

La tinción de Romanowsky es una técnicas de tinción prototípica que fue predecesora de varios métodos distintos, pero basados en principios similares entre los que se incluyen las tinciones de Giemsa, Jenner, Wright, Field, y Leishman, las cuales son utilizadas para diferenciar diferentes tipos de células en especímenes patológicos.

Un extendido sanguíneo coloreado con Giemsa mostrando una infección por Plasmodium falciparum^[1]​

Examen microscópico de extendidos sanguíneos

 

Ernst Malachowski

Para este propósito Paul Ehrlich en 1879 había comenzado utilizando una mezcla de colorantes ácidos y básicos, por ejemplo fucsina (colorante ácido) y azul de metileno (colorante básico).^[2]​ En 1891 Ernst Malachowski^[3]​^[4]​^[5]​ y Dmitry Leonidovich Romanowsky^[6]​^[7]​^[8]​ desarrollaron de manera independiente sendas técnicas haciendo uso de una mezcla de eosina y azul de metileno modificado que produjo un sorprendente tono imposible de atribuir a ninguno de los componentes de tinción: un hermoso, distintivo color púrpura.^[9]​^[10]​ Los requerimientos para que ocurra el efecto Malachowski-Romanowsky-Giemsa son:

1. Un colorante catiónico: el mejor colorante es el Azur B y, a pesar de que el colorante Azur A es el responsable del color púrpura del núcleo, el azul que confiere al citoplasma es inferior. Ningún otro colorante catiónico que no sea el azul de metileno resulta adecuado.
2. Un colorante aniónico: El más comúnmente utilizado es la Eosina Y.^[11]​

Debido a que las soluciones acuosas de colorantes eran inestables, se introdujo metanol como un disolvente, y William Boog Leishman^[12]​ y James Homer Wright^[13]​ abogaron también por el uso de metanol como fijador antes de la tinción. Gustav Giemsa mejoró esta técnica mediante la estandarización de las soluciones de colorantes y la adición de glicerol para aumentar su estabilidad.^[14]​

La demetilación del azul de metileno en solución acuosa utilizando calor y un álcali produce una mezcla de Azur A, Azur B, violeta de metileno y azul de metileno. Luego se añade Eosina Y para producir un colorante "neutro". El precipitado formado se disuelve después en una mezcla de glicerol y metanol, para formar una solución de almacenaje (de stock); luego esta solución de stock se disuelve con agua o una solución acuosa tamponada para formar la solución de trabajo que es utilizada para teñir las muestras patológicas. La solución de trabajo es estable por tres horas.^[15]​

Los procedimientos de captura inmunocromatográfica (malaria antigen detection test) son una alternativa de diagnóstico no microscópico para aquellos laboratorios que no pueden disponer de un microscopista experto.^[16]​

Véase también

• Tinción

Referencias

1. Hempelmann E, Tesarowicz I, Oleksyn BJ (2008). «Malaria wciąż groźna». Wszechświat 109: 180-189. 
2. Ehrlich P (1880). . Z klin Med 1: 553-560. Archivado desde el original el 19 de febrero de 2012. 
3. Malachowski E (1891). «Zur Morphologie des Plasmodium malariae». Centbl f klin Med 31: 601-603. 
4. Krafts KP, Hempelmann E, Oleksyn BJ (2011). «The color purple: from royalty to laboratory, with apologies to Malachowski». Biotech Histochem 86 (1): 7-35. PMID 21235291. doi:10.3109/10520295.2010.515490. 
5. Krafts K, Hempelmann E, Oleksyn BJ (2011). «In search of the malarial parasite : Biographical sketches of the blood stain contributors». Parasitol Research 109 (3): 521-529. PMID 21660627. doi:10.1007/s00436-011-2475-4. 
6. Романовскiй Д.Л. (1890). «Къ вопросу о строенiи чужеядныхъ малярiи». Врачъ 52: 1171-1173. 
7. Романовскiй Д.Л. Къ вопросу о паразитологiи и терапiи болотной лихорадки. Диссертацiя на степень доктора медицины. Спб. 1891 г., 118 с.
8. Romanowsky D (1891). «Zur Frage der Parasitologie und Therapie der Malaria». St Petersburg Med Wochenschr 16: 297-302, 307-315. 
9. Horobin RW, Walter KJ (1987). «Understanding Romanowsky staining. I: The Romanowsky-Giemsa effect in blood smears». Histochemistry 86 (3): 331-336. PMID 2437082. 
10. Woronzoff-Dashkoff KK. (2002). «The wright-giemsa stain. Secrets revealed». Clin Lab Med. 22 (1): 15-23. PMID 11933573. doi:10.1016/S0272-2712(03)00065-9. 
11. Wittekind D (1979). «On the nature of Romanowsky dyes and the Romanowsky-Giemsa effect». Clin Lab Haematol 1 (4): 247-262. PMID 94558. doi:10.1111/j.1365-2257.1979.tb01090.x. 
12. Leishman W (1901). «Note on a Simple and Rapid Method of Producing Romanowsky Staining in Malarial and other Blood Films». Br Med J 2 (2125): 757-758. PMC 2507168. PMID 20759810. doi:10.1136/bmj.2.2125.757. 
13. Wright JH (1902). «A Rapid Method for the Differential Staining of Blood Films and Malarial Parasites». J Med Res. 7 (1): 138-144. PMC 2105822. PMID 19971449. 
14. Giemsa G (1904). «Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung». Centralbl f Bakt etc 37: 308-311. 
15. Marshall PN, Bentley SA, Lewis SM. (1978). . J Clin Pathol 31 (3): 280-282. PMC 1145244. PMID 76638. doi:10.1136/jcp.31.3.280. Archivado desde el original el 27 de febrero de 2012. Consultado el 4 de abril de 2012. 
16. Hempelmann E, Wilson RJM (1982). «Immunoprecipitation of malarial enzymes». Protozoology 29: 637. 

Enlaces externos

• sitio web del CDC dedicado al diagnóstico y tratamiento de la malaria
• Métodos de tinción para la identificación de parásitos de la malaria
• Este sitio del Royal Perth Hospital (Australia) provee un excelente paneo general acerca de los métodos diagnósticos para la malaria
• El Laboratorio de Referencia de Malaria del Public Health Laboratory Service en el Reino Unido
• Chenzinsky and Romanowsky On the 120th Anniversary of the Discovery of the Romanowsky Effect

•   Datos: Q19659194