En biología molecular, una sonda de hibridación es un fragmento de ADN o ARN de longitud variable (habitualmente, 100-1000 bases), que se utiliza en el estudio de muestras de ADN o ARN, para detectar la presencia de secuencia de nucleótidos (la meta de ADN) que son complementarias a la secuencia de la sonda.
La sonda de lo que se hibrida es una sola cadena de ácidos nucleicos (ADN o ARN) cuya secuencia de bases permite que la sonda objetivo complete los pares de bases, debido a la complementariedad entre la sonda y el objetivo de ING.
La sonda marcada primero es desnaturalizada (por calentamiento intenso o bajo condiciones alcalinas tales como la exposición al hidróxido de sodio) en el ADN de cadena sencilla (ssDNA) y luego hibridada al ssDNA (Southern blot) o al ARN (northern blot) inmovilizado en una membrana o in situ.[1]
Para detectar la hibridación de la sonda con su secuencia diana, la sonda se marca (o etiqueta) con un marcador molecular fluorescente o radiactivo. Los marcadores utilizados son . P 32 (un isótopo radioactivo de fósforo incorporado en el enlace fosfodiéster en el ADN de la sonda) o digoxigenina, que no está basada en anticuerpos radiactivos marcados.
Las secuencias de ADN o ARN transcritos que tienen de moderada a alta similitud de secuencia con la sonda son detectadas mediante la visualización de la sonda hibridada por autorradiografía u otras técnicas de imagen. Normalmente, ya sea imágenes de rayos X se toman del filtro o el filtro se coloca bajo luz ultravioleta.
La detección de las secuencias con similitud moderada o alta depende de lo estrictas que fueran las condiciones de hibridación aplicadas: si son de alto rigor, tales como temperatura de hibridación alta y baja salinidad de los tampones de hibridación, sólo permiten la hibridación entre ácidos nucleicos con secuencias muy similares, mientras que si son de baja severidad, como la reducción de la temperatura y alta concentración de la sal, la hibridación permite que las secuencias sean menos similares. Sondas de hibridación de ADN utilizado en microarreglos se refieren a ADN covalentemente a una superficie inerte, como láminas de vidrio recubiertos o chips de genes, y que es un blanco móvil de ADNc hibridado.
Dependiendo del método que se use, la sonda puede sintetizada utilizando el método de fosforamidita o generada y etiquetada mediante amplificación por PCR y la clonación (los métodos más antiguos). Con el fin de aumentar la estabilidad in vivo de la sonda de ARN no se utiliza, en lugar de ARN análogos se puede utilizar, en particular, morfolino. Molecular del ADN o sondas de ARN basados son ahora rutinariamente utilizados en las bibliotecas de genes de selección, la detección de secuencias de nucleótidos con los métodos de borrar, y en las tecnologías de otros genes, como los microarrays.
Algunos tipos de sondas
Sondas Scorpion®
Sondas Molecular Beacon
Sondas TaqMan®
Sondas LNA® (Locked Nucleic Acid)
Cycling Probe Technology (CPT)
Uso en la ciencia forense
En la ciencia forense, sondas de hibridación se utilizan, por ejemplo, para la detección de repeticiones en tándem cortas ( microsatélites) y en las regiones RFLP, todos los cuales son ampliamente utilizados como parte del análisis del ADN.
Southern, Edwin Mellor (5 de noviembre de 1975). «Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis». Journal of Molecular Biology98 (3): 503-517. ISSN 0022-2836. PMID 1195397. doi:10.1016/S0022-2836(75)80083-0.
Desmond S. T. Nicholl. (2008). Genetic Engineering(en inglés) (3ra edición). Cambridge.
Datos:Q418436
Agosto 03, 2021
sonda, hibridación, este, artículo, sección, necesita, revisión, ortografía, gramática, puedes, colaborar, editándolo, cuando, haya, corregido, puedes, borrar, este, aviso, iniciado, sesión, puedes, ayudarte, corrector, ortográfico, activándolo, preferencias, . Este articulo o seccion necesita una revision de ortografia y gramatica Puedes colaborar editandolo Cuando se haya corregido puedes borrar este aviso Si has iniciado sesion puedes ayudarte del corrector ortografico activandolo en Mis preferencias Accesorios Navegacion El corrector ortografico resalta errores ortograficos con un fondo rojo Este aviso fue puesto el 28 de mayo de 2020 Vease tambien sonda molecular En biologia molecular una sonda de hibridacion es un fragmento de ADN o ARN de longitud variable habitualmente 100 1000 bases que se utiliza en el estudio de muestras de ADN o ARN para detectar la presencia de secuencia de nucleotidos la meta de ADN que son complementarias a la secuencia de la sonda La sonda de lo que se hibrida es una sola cadena de acidos nucleicos ADN o ARN cuya secuencia de bases permite que la sonda objetivo complete los pares de bases debido a la complementariedad entre la sonda y el objetivo de ING La sonda marcada primero es desnaturalizada por calentamiento intenso o bajo condiciones alcalinas tales como la exposicion al hidroxido de sodio en el ADN de cadena sencilla ssDNA y luego hibridada al ssDNA Southern blot o al ARN northern blot inmovilizado en una membrana o in situ 1 Para detectar la hibridacion de la sonda con su secuencia diana la sonda se marca o etiqueta con un marcador molecular fluorescente o radiactivo Los marcadores utilizados son P32 un isotopo radioactivo de fosforo incorporado en el enlace fosfodiester en el ADN de la sonda o digoxigenina que no esta basada en anticuerpos radiactivos marcados Las secuencias de ADN o ARN transcritos que tienen de moderada a alta similitud de secuencia con la sonda son detectadas mediante la visualizacion de la sonda hibridada por autorradiografia u otras tecnicas de imagen Normalmente ya sea imagenes de rayos X se toman del filtro o el filtro se coloca bajo luz ultravioleta La deteccion de las secuencias con similitud moderada o alta depende de lo estrictas que fueran las condiciones de hibridacion aplicadas si son de alto rigor tales como temperatura de hibridacion alta y baja salinidad de los tampones de hibridacion solo permiten la hibridacion entre acidos nucleicos con secuencias muy similares mientras que si son de baja severidad como la reduccion de la temperatura y alta concentracion de la sal la hibridacion permite que las secuencias sean menos similares Sondas de hibridacion de ADN utilizado en microarreglos se refieren a ADN covalentemente a una superficie inerte como laminas de vidrio recubiertos o chips de genes y que es un blanco movil de ADNc hibridado Dependiendo del metodo que se use la sonda puede sintetizada utilizando el metodo de fosforamidita o generada y etiquetada mediante amplificacion por PCR y la clonacion los metodos mas antiguos Con el fin de aumentar la estabilidad in vivo de la sonda de ARN no se utiliza en lugar de ARN analogos se puede utilizar en particular morfolino Molecular del ADN o sondas de ARN basados son ahora rutinariamente utilizados en las bibliotecas de genes de seleccion la deteccion de secuencias de nucleotidos con los metodos de borrar y en las tecnologias de otros genes como los microarrays Algunos tipos de sondas EditarSondas Scorpion Sondas Molecular BeaconSondas TaqMan Sondas LNA Locked Nucleic Acid Cycling Probe Technology CPT Uso en la ciencia forense EditarEn la ciencia forense sondas de hibridacion se utilizan por ejemplo para la deteccion de repeticiones en tandem cortas microsatelites y en las regiones RFLP todos los cuales son ampliamente utilizados como parte del analisis del ADN 2 Referencias Editar Southern Edwin Mellor 5 de noviembre de 1975 Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis Journal of Molecular Biology 98 3 503 517 ISSN 0022 2836 PMID 1195397 doi 10 1016 S0022 2836 75 80083 0 Desmond S T Nicholl 2008 Genetic Engineering en ingles 3ra edicion Cambridge Datos Q418436Obtenido de https es wikipedia org w index php title Sonda de hibridacion amp oldid 135529435, wikipedia, wiki, leyendo, leer, libro, biblioteca,
