La criofractura es una técnica utilizada en microscopia electrónica, que consiste en la congelación de muestras biológicas con nitrógeno líquido (-195,8°C), seguido de un corte o fractura y el sombreado metálico o recubrimiento con carbono de la superficie de la muestra. Luego procediendo a la eliminación del tejido biológico subyacente al sombreado y la observación de esta réplica de la muestra mediante el uso de un microscopio electrónico de transmisión[1][2]
Historia
La técnica de la criofractura fue desarrollada de manera temprana en 1957 por el científico Russell Steere,[3] sin embargo no fue hasta 1960, cuando Daniel Branton[4] comienza investigar mediante criofractura y a exhibir las imágenes obtenidas, demostrando que poseían la claridad necesaria para convencer al mundo científico de su utilidad en la investigación. Esta técnica llegó a su auge como fuente de investigación celular en las décadas del 70 y 80, al proporcionar avances en la comprensión de la organización estructural de membranas y organelos imposibles de identificar mediante el uso de otras técnicas existentes.[5]
Son cuatro los pasos esenciales para la realización de una replica por criofractura:[6]
1. Congelación rápida de la muestra: esto se logra sumergiendo rápidamente la muestra (previamente tratada con un crioprotector como el glicerol para evitar la formación de cristales de hielo en el interior de la muestra) en nitrógeno líquido, a una temperatura cercana a los −195,8 °C.
2. Fractura de la muestra: se lleva a cabo en condiciones de vacío, bajo una cuchilla de diamante o rompiéndola en un dispositivo de bisagra. También existe la variante simple de la técnica, en que la fracturación se efectúa en una atmósfera de nitrógeno líquido, a una presión de 3 atm con el uso de una cuchilla de afeitar.
3. Fijación de platino-carbono: se procede a evaporar una fina capa de carbono - platino sobre la muestra. Así, las características topográficas de la superficie congelada se convierten en variaciones en el espesor de la capa de platino depositada sobre la muestra.
4. Limpieza de la réplica: posteriormente a la fijación, la muestra se lleva a presión atmosférica y se le deja calentar a temperatura ambiente. El material biológico restante en la replica es eliminado mediante el empleo de una solución de ácido crómico, hipoclorito de sodio u otros agentes limpiadores.
Steere, R.L. Electron microscopy of structural detail in frozen biological specimens. J. Biophys. Biochem. Cytol. 3, 45–60 (1957).
Branton, D. 1966. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 55:1048–1056.
Wehrli, E., Mühlethaler, K. & Moor, H. Membrane structure as seen with a double replica method for freeze-fracturing. Exp. Cell Res. 59, 336–339 (1970).
criofractura, criofractura, técnica, utilizada, microscopia, electrónica, consiste, congelación, muestras, biológicas, nitrógeno, líquido, seguido, corte, fractura, sombreado, metálico, recubrimiento, carbono, superficie, muestra, luego, procediendo, eliminaci. La criofractura es una tecnica utilizada en microscopia electronica que consiste en la congelacion de muestras biologicas con nitrogeno liquido 195 8 C seguido de un corte o fractura y el sombreado metalico o recubrimiento con carbono de la superficie de la muestra Luego procediendo a la eliminacion del tejido biologico subyacente al sombreado y la observacion de esta replica de la muestra mediante el uso de un microscopio electronico de transmision 1 2 Indice 1 Historia 2 Tecnica 3 Referencias 4 Vease tambienHistoria EditarLa tecnica de la criofractura fue desarrollada de manera temprana en 1957 por el cientifico Russell Steere 3 sin embargo no fue hasta 1960 cuando Daniel Branton 4 comienza investigar mediante criofractura y a exhibir las imagenes obtenidas demostrando que poseian la claridad necesaria para convencer al mundo cientifico de su utilidad en la investigacion Esta tecnica llego a su auge como fuente de investigacion celular en las decadas del 70 y 80 al proporcionar avances en la comprension de la organizacion estructural de membranas y organelos imposibles de identificar mediante el uso de otras tecnicas existentes 5 Tecnica Editar Microscopio electronico de transmision Herramienta utilizada en la visualizacion de muestras obtenidas mediante criofractura Son cuatro los pasos esenciales para la realizacion de una replica por criofractura 6 1 Congelacion rapida de la muestra esto se logra sumergiendo rapidamente la muestra previamente tratada con un crioprotector como el glicerol para evitar la formacion de cristales de hielo en el interior de la muestra en nitrogeno liquido a una temperatura cercana a los 195 8 C 2 Fractura de la muestra se lleva a cabo en condiciones de vacio bajo una cuchilla de diamante o rompiendola en un dispositivo de bisagra Tambien existe la variante simple de la tecnica en que la fracturacion se efectua en una atmosfera de nitrogeno liquido a una presion de 3 atm con el uso de una cuchilla de afeitar 3 Fijacion de platino carbono se procede a evaporar una fina capa de carbono platino sobre la muestra Asi las caracteristicas topograficas de la superficie congelada se convierten en variaciones en el espesor de la capa de platino depositada sobre la muestra 4 Limpieza de la replica posteriormente a la fijacion la muestra se lleva a presion atmosferica y se le deja calentar a temperatura ambiente El material biologico restante en la replica es eliminado mediante el empleo de una solucion de acido cromico hipoclorito de sodio u otros agentes limpiadores Referencias Editar http www medicoscubanos com diccionario medico aspx q criofractura http encina pntic mec es esarment web 20maluque imagenes Visita 20al 20CBM pdf Steere R L Electron microscopy of structural detail in frozen biological specimens J Biophys Biochem Cytol 3 45 60 1957 Branton D 1966 Proc Natl Acad Sci USA 55 1048 1056 Wehrli E Muhlethaler K amp Moor H Membrane structure as seen with a double replica method for freeze fracturing Exp Cell Res 59 336 339 1970 https web archive org web 20101031132849 http www nature com nprot journal v2 n3 full nprot 2007 55 htmlVease tambien EditarMicroscopia electronica Histologia Membrana plasmatica Datos Q3005718 Multimedia Category Freeze fracturing Obtenido de https es wikipedia org w index php title Criofractura amp oldid 137116323, wikipedia, wiki, leyendo, leer, libro, biblioteca,
