Colorimetría (método químico)
En física y química analítica, la colorimetría es una técnica "utilizada para determinar la concentración de compuestos coloreados en solución".[1] Un colorímetro es un dispositivo utilizado para probar la concentración de una solución al medir su absorbancia de una longitud de onda específica de la luz (no debe confundirse con el colorímetro triestímulo usado para medir los colores en general).
Para usar el colorímetro, se deben hacer diferentes soluciones, incluido un control o referencia de concentración conocida. Con un colorímetro visual, por ejemplo, el colorímetro Duboscq, la longitud de la trayectoria de la luz a través de las soluciones se puede variar mientras se compara la luz filtrada transmitida a través de ellas para una coincidencia visual. La longitud de la trayectoria del tiempo de concentración se considera igual cuando los colores coinciden, por lo que la concentración de lo desconocido puede determinarse por proporciones simples.[2] Los tubos de Nessler funcionan sobre el mismo principio.
También hay colorímetros electrónicos automatizados; antes de utilizar estas máquinas, deben calibrarse con una cubeta que contenga la solución de control. La concentración de una muestra se puede calcular a partir de la intensidad de la luz antes y después de que pase a través de la muestra mediante la ley de Beer-Lambert. Los analizadores fotoeléctricos llegaron a dominar en los años sesenta.
El color o la longitud de onda del filtro elegido para el colorímetro es extremadamente importante, ya que la longitud de onda de la luz que se transmite por el colorímetro tiene que ser la misma que la absorbida por la sustancia que se mide. Por ejemplo, el filtro en un colorímetro puede configurarse en rojo si el líquido es azul.
Colorímetro de absorción
Un colorímetro es un dispositivo utilizado para probar la concentración de una solución al medir su absorbancia de una longitud de onda específica de la luz. Para usar este dispositivo, se deben hacer diferentes soluciones, y primero se coloca un control (generalmente una mezcla de agua destilada y otra solución) en una cubeta y se coloca dentro de un colorímetro para calibrar la máquina. Solo después de que se haya calibrado el dispositivo, puede utilizarlo para encontrar las densidades y/o concentraciones de las otras soluciones. Para ello, repita la calibración, excepto con las cubetas llenas con las otras soluciones. El filtro en un colorímetro debe configurarse en rojo si el líquido es azul. El tamaño del filtro elegido inicialmente para el colorímetro es extremadamente importante, ya que la longitud de onda de la luz que se transmite por el colorímetro tiene que ser la misma que la absorbida por la sustancia.
Ensayos colorimétricos
Los ensayos colorimétricos utilizan reactivos que experimentan un cambio de color medible en presencia del analito. Son ampliamente utilizados en bioquímica para probar la presencia de enzimas, compuestos específicos, anticuerpos, hormonas y muchos más analitos. Por ejemplo,
- El para-nitrofenilfosfato se convierte en un producto amarillo por la enzima fosfatasa alcalina.
- Coomassie Blue una vez que se une a las proteínas provoca un cambio de espectro, lo que permite la dosificación cuantitativa. Un ensayo colorimétrico similar, el ensayo de ácido bicinconínico, usa una reacción química para determinar la concentración de proteína.
- Los inmunoensayos ligados a enzimas utilizan anticuerpos complejados con enzimas para detectar antígenos. La unión del anticuerpo a menudo se deduce del cambio de color de reactivos como TMB.
Véase también
- Jules Duboscq
- Permanganometría
- Colorímetro Lovibond
- Turbidimetría
Referencias
- Housecroft, Catherine; Constable, Edwin (2006). Chemistry: an introduction to organic, inorganic, and physical chemistry. Pearson Education. pp. 349-353. ISBN 978-0-13-127567-6.
- Louis Rosenfeld (1999). Four centuries of clinical chemistry. CRC Press. pp. 255-258. ISBN 978-90-5699-645-1.