Método de obtención de copias de moléculas de ADN similar a la PCR tradicional, pero que usa una temperatura constante, en lugar de efectuar ciclos repetidos de desnaturalización e hibridación/elongación. En lugar de la desnaturalización térmica, se utiliza ADN helicasa, una enzima que desespiraliza el ADN.
Metodología
Las dobles cadenas de ADN se separan primero mediante una ADN helicasa y se recubren con proteínas de unión a ADN de cadena sencilla (ADNss). En el segundo paso, se hibridan dos secuencias de cebadores específicos a cada borde del molde de ADN. Luego se usan ADN polimerasas para elongar los cebadores hidridados a los moldes, con el fin de producir un ADN de doble cadena, y los dos productos de ADN recién sintetizados se usan luego como sustratos por parte de las ADN helicasas, entrando así en el siguiente ciclo de la reacción. De ese modo, se desarrolla una reacción en cadena simultánea, provocando una amplificación exponencial de la secuencia diana seleccionada (puede ver un diagrama esquemático en Vincent et al.., 2004[1]).
Referencias
Vincent M, Xu Y, Kong H. (2004). «Helicase-dependent isothermal DNA amplification». EMBO Rep5 (8): 795-800. PMC 1249482. PMID 15247927. doi:10.1038/sj.embor.7400200.
Datos:Q1583642
Agosto 05, 2021
amplificación, dependiente, helicasa, método, obtención, copias, moléculas, similar, tradicional, pero, temperatura, constante, lugar, efectuar, ciclos, repetidos, desnaturalización, hibridación, elongación, lugar, desnaturalización, térmica, utiliza, helicasa. Metodo de obtencion de copias de moleculas de ADN similar a la PCR tradicional pero que usa una temperatura constante en lugar de efectuar ciclos repetidos de desnaturalizacion e hibridacion elongacion En lugar de la desnaturalizacion termica se utiliza ADN helicasa una enzima que desespiraliza el ADN Metodologia EditarLas dobles cadenas de ADN se separan primero mediante una ADN helicasa y se recubren con proteinas de union a ADN de cadena sencilla ADNss En el segundo paso se hibridan dos secuencias de cebadores especificos a cada borde del molde de ADN Luego se usan ADN polimerasas para elongar los cebadores hidridados a los moldes con el fin de producir un ADN de doble cadena y los dos productos de ADN recien sintetizados se usan luego como sustratos por parte de las ADN helicasas entrando asi en el siguiente ciclo de la reaccion De ese modo se desarrolla una reaccion en cadena simultanea provocando una amplificacion exponencial de la secuencia diana seleccionada puede ver un diagrama esquematico en Vincent et al 2004 1 Referencias Editar Vincent M Xu Y Kong H 2004 Helicase dependent isothermal DNA amplification EMBO Rep 5 8 795 800 PMC 1249482 PMID 15247927 doi 10 1038 sj embor 7400200 Datos Q1583642Obtenido de https es wikipedia org w index php title Amplificacion dependiente de helicasa amp oldid 120626591, wikipedia, wiki, leyendo, leer, libro, biblioteca,
